奥希替尼耐药非小细胞肺癌细胞系的建立及耐药机制的初步研究

摘要:

目的:建立非小细胞肺癌(NSCLC)第三代EGFR-TKI奥希替尼(Osimertinib)耐药细胞系并初步探讨其耐药机制。方法:以人NSCLC细胞系H1975为研究对象，利用低浓度奥希替尼持续诱导筛选继发耐药细胞系。MTS法检测细胞奥希替尼药物敏感性。活细胞工作站检测细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡。利用蛋白质谱检测数据构建亲代与耐药细胞的差异表达基因谱并通过qRT-PCR和Wester blot验证耐药相关基因。结果:成功获得奥希替尼继发耐药H1975/OSI细胞。与亲代细胞相比，H1975/OSI细胞的耐药指数增加了27.25倍( P<0.01)，细胞增殖能力降低但凋亡抗性增加( P＝0.01)且未产生EGFR-TKI耐药常见相关基因的突变。同时建立起H1975与H1975/OSI细胞蛋白质差异表达谱，发现耐药细胞上调蛋白307个，下调蛋白295个，其中在H1975/OSI细胞中表达增加的成纤维细胞特异蛋白(FSP1)被干扰后，干扰细胞对奥希替尼的敏感性增加(IC50值下降3.51倍， P＝0.02)。在亲代H1975细胞中过表达FSP1，奥希替尼对细胞的IC50值增加了3.75倍( P<0.01)。 结论:成功建立人NSCLC奥希替尼耐药细胞系H1975/OSI；成功构建H1975与H1975/OSI蛋白质差异表达谱；FSP1蛋白可能通过增加H1975/OSI的凋亡抗性介导奥希替尼耐药。

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